鯉魚肝原代細胞的分離與培養(yǎng)方法

摘要：本研究在酶消化法的基礎上,通過比較不同的肝組織分離和培養(yǎng)條件,獲得鯉魚肝原代細胞培養(yǎng)的最佳培養(yǎng)方法和條件。首先,結合細胞數量和臺盼藍染色所得的細胞存活率,比較了胰蛋白酶消化鯉魚肝組織的不同反應溫度和時間,結果表明：肝組織用0.25%（m/V）胰蛋白酶在25℃消化40 min時細胞分離效果最好。其次,經酶消化得到的肝原代細胞粗制液,設置4種不同的細胞純化和培養(yǎng)條件：1）將細胞直接重懸于含10%胚牛血清（FBS）的L-15/DMEM培養(yǎng)基中培養(yǎng);2）以10%鯉魚血清取代培養(yǎng)基中的胚牛血清重懸細胞并培養(yǎng);3）將細胞經Percoll液密度梯度離心純化后,重懸于含10%胚牛血清的L-15/DMEM培養(yǎng)基中培養(yǎng);4）細胞經Percoll純化后,重懸于含10%鯉魚血清的L-15/DMEM培養(yǎng)基中培養(yǎng)。利用光學顯微鏡觀察肝細胞的形態(tài),進而通過HE染色法檢測,結果表明經Percoll純化后,肝細胞純度顯著提高;采用MTS/PMS法檢測肝細胞的增殖情況,結果表明鯉魚血清代替胚牛血清培養(yǎng)細胞,肝細胞活力顯著提高。本研究將為建立穩(wěn)定的毒理學肝原代細胞實驗模型奠定基礎。