摘要：本研究在酶消化法的基礎(chǔ)上,通過比較不同的肝組織分離和培養(yǎng)條件,獲得鯉魚肝原代細(xì)胞培養(yǎng)的最佳培養(yǎng)方法和條件。首先,結(jié)合細(xì)胞數(shù)量和臺(tái)盼藍(lán)染色所得的細(xì)胞存活率,比較了胰蛋白酶消化鯉魚肝組織的不同反應(yīng)溫度和時(shí)間,結(jié)果表明：肝組織用0.25%（m/V）胰蛋白酶在25℃消化40 min時(shí)細(xì)胞分離效果最好。其次,經(jīng)酶消化得到的肝原代細(xì)胞粗制液,設(shè)置4種不同的細(xì)胞純化和培養(yǎng)條件：1）將細(xì)胞直接重懸于含10%胚牛血清（FBS）的L-15/DMEM培養(yǎng)基中培養(yǎng);2）以10%鯉魚血清取代培養(yǎng)基中的胚牛血清重懸細(xì)胞并培養(yǎng);3）將細(xì)胞經(jīng)Percoll液密度梯度離心純化后,重懸于含10%胚牛血清的L-15/DMEM培養(yǎng)基中培養(yǎng);4）細(xì)胞經(jīng)Percoll純化后,重懸于含10%鯉魚血清的L-15/DMEM培養(yǎng)基中培養(yǎng)。利用光學(xué)顯微鏡觀察肝細(xì)胞的形態(tài),進(jìn)而通過HE染色法檢測(cè),結(jié)果表明經(jīng)Percoll純化后,肝細(xì)胞純度顯著提高;采用MTS/PMS法檢測(cè)肝細(xì)胞的增殖情況,結(jié)果表明鯉魚血清代替胚牛血清培養(yǎng)細(xì)胞,肝細(xì)胞活力顯著提高。本研究將為建立穩(wěn)定的毒理學(xué)肝原代細(xì)胞實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ偷於ɑA(chǔ)。