應用芯片式數(shù)字PCR檢測人血清中登革病毒載量

摘要：目的建立芯片式數(shù)字PCR絕對定量技術,用于登革病例血清中登革病毒載量絕對定量并分析載量變化情況。方法選取發(fā)病1~7d登革實驗室確診病例血清樣本,提取病毒RNA并逆轉錄為cDNA,取3μL或4.5μL cDNA,配制15μL反應體系,采用QuantStudio 3D Digital PCR Chip Loader儀器制作芯片,將芯片置于Dual Flat Block GeneAmp PCR System 9700運行PCR,最后在QuantStudio TM 3D Digital PCR System中讀取結果并應用QuantStudio^ TM 3D AnalysisSuite TM Software進行分析,根據(jù)實驗稀釋倍數(shù)計算血清中登革病毒載量。結果芯片制作良好,有效孔數(shù)高,檢測結果重復性較好,示病例發(fā)病第1~7d血清中的登革病毒載量分別是10^7.646 ,10^7.544 ,10^7.298 ,10^6.990 ,10^5.823 ,10^4.732 ,10^4.221 copies/mL。結論應用芯片式數(shù)字PCR檢測血清中登革病毒載量的方法可行,可應用于登革病毒載量的絕對定量。登革病毒載量隨著病程的發(fā)展而降低。