人腺病毒六鄰體高變區(qū)蛋白的亞克隆表達(dá)及純化

摘要：目的克隆表達(dá)人腺病六鄰體高變區(qū)片段,了解其結(jié)構(gòu)和功能,為研發(fā)腺病毒基因工程重組疫苗奠定基礎(chǔ)。方法根據(jù)生物信息學(xué)軟件預(yù)測(cè)的腺病毒六鄰體的高變區(qū)域,選擇目標(biāo)基因,設(shè)計(jì)其對(duì)應(yīng)的引物,并以團(tuán)隊(duì)保存的人腺病毒六鄰體核酸序列為模板,聚合酶鏈反應(yīng)擴(kuò)增目標(biāo)基因,定向插入載體pQE32中構(gòu)建工程質(zhì)粒。通過(guò)酶切和基因測(cè)序鑒定陽(yáng)性工程質(zhì)粒,并誘導(dǎo)其在大腸桿菌M15中高效表達(dá)帶有組氨酸標(biāo)記的靶蛋白,應(yīng)用鎳樹(shù)脂親和層析的方法分離純化靶蛋白。結(jié)果構(gòu)建了含有人腺病毒六鄰體高變區(qū)片段的重組質(zhì)粒,同時(shí)探索出其在大腸桿菌M15中高效表達(dá)的條件,純化目標(biāo)蛋白,其分子量約為188000,與應(yīng)用生物信息學(xué)分析預(yù)測(cè)的結(jié)果相同。結(jié)論成功地克隆、表達(dá)和純化了人腺病毒六鄰體高變區(qū)片段。