應用RNA干擾技術抑制人胃癌細胞環氧合酶-2基因的表達研究

摘要：目的研究應用RNA干擾技術進行抑制胃癌SGC-7901細胞COX-2的表達研究。方法依據siRNA設計原則，針對人COX-2的mRNA序列，設計并合成3條21bp的雙鏈RNA，瞬時轉染人胃癌細胞SGC-7901，Western印跡t驗證基因沉默效率以篩選合適的siRNA序列；根據篩選出的有效序列，合成編碼短發卡RNA的雙鏈寡核苷酸，定向克隆到含有U6RNA聚合酶Ⅲ啟動子的pSilencer^TM2．1-U6neo真核表達載體，穩定轉染胃癌細胞SGC-7901中，經G418篩選，獲得克隆細胞。結果篩選出一條有效的干擾序列，位于291—311bp，成功構建表達載體，COX-2在蛋白水平的表達明顯被抑制。結論利用化學合成siRNA進行初篩，再構建shRNA表達載體，可快速實現目的基因的表達抑制。