首頁 > 期刊 > 自然科學與工程技術 > 醫藥衛生科技 > 基礎醫學 > 國際遺傳學 > 應用RNA干擾技術抑制人胃癌細胞環氧合酶-2基因的表達研究 【正文】
摘要:目的研究應用RNA干擾技術進行抑制胃癌SGC-7901細胞COX-2的表達研究。方法依據siRNA設計原則,針對人COX-2的mRNA序列,設計并合成3條21bp的雙鏈RNA,瞬時轉染人胃癌細胞SGC-7901,Western印跡t驗證基因沉默效率以篩選合適的siRNA序列;根據篩選出的有效序列,合成編碼短發卡RNA的雙鏈寡核苷酸,定向克隆到含有U6RNA聚合酶Ⅲ啟動子的pSilencer^TM2.1-U6neo真核表達載體,穩定轉染胃癌細胞SGC-7901中,經G418篩選,獲得克隆細胞。結果篩選出一條有效的干擾序列,位于291—311bp,成功構建表達載體,COX-2在蛋白水平的表達明顯被抑制。結論利用化學合成siRNA進行初篩,再構建shRNA表達載體,可快速實現目的基因的表達抑制。
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