摘要：目的研究和建立一種從天然產(chǎn)物中高效篩選14-3-3τ蛋白抑制劑的方法,并初步探討所篩選活性化合物與14-3-3τ蛋白相互作用的位點(diǎn)。方法采用液相色譜-熒光分析方法對(duì)天然產(chǎn)物中具有14-3-3τ結(jié)合活性的化合物進(jìn)行篩選研究,通過表面等離子共振(SPR)技術(shù)對(duì)篩選結(jié)果進(jìn)行驗(yàn)證,再通過分子對(duì)接技術(shù)進(jìn)行活性化合物的作用位點(diǎn)的預(yù)測(cè),進(jìn)而選擇主要的結(jié)合位點(diǎn),使用氨基酸定點(diǎn)突變體進(jìn)行結(jié)合位點(diǎn)的驗(yàn)證。結(jié)果從82個(gè)備選天然產(chǎn)物中篩選出了17個(gè)不同類別的具有潛在14-3-3τ結(jié)合活性的化合物,并通過SPR實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證了其中10個(gè)化合物的結(jié)合活性;使用分子對(duì)接技術(shù)預(yù)測(cè)它們與14-3-3τ蛋白的結(jié)合位點(diǎn)主要為Arg56、Arg127和Tyr128,并使用3個(gè)14-3-3τ蛋白定點(diǎn)突變體R56A、R127A和Y128A,證明了其中5個(gè)化合物與目標(biāo)蛋白的結(jié)合與此3位點(diǎn)相關(guān)。結(jié)論所建立的方法準(zhǔn)確高效,可用于快速篩選天然產(chǎn)物中14-3-3τ小分子抑制劑,為新型乳腺癌治療藥物的研發(fā)提供了新的參考和途徑。