首頁 > 期刊 > 自然科學與工程技術 > 農業科技 > 農業綜合 > 甘肅農業大學學報 > 抗草甘膦與磷高效吸收基因雙價表達載體的構建及對甘藍型油菜的遺傳轉化 【正文】
摘要:【目的】甘藍型油菜是產油效率較高的油料作物,在其生長過程中往往伴隨著土壤環境中磷素匱乏及雜草脅迫,嚴重影響著最終產量和品質.因此,同時解決有效磷匱乏及草害問題已經成為目前油菜研究的重要方向.【方法】采用PCR法克隆得到了與草甘膦抗性(eCTP和EPSPS)和磷高效吸收(Pht1;2和phyA )的相關目的基因,隨后構建了雙價植物表達載體,通過農桿菌介導法轉化甘藍型油菜,對轉化植株進行PCR檢測篩選,并通過qRT-PCR法對篩選的陽性植株內目的基因的表達進行定量分析.【結果】將PCR擴增得到的片段經瓊脂糖凝膠電泳檢測,結果符合預期.測序結果也與GenBank注冊序列同源性高度一致,可用于后續試驗.對轉基因油菜進行草甘膦抗性篩選和PCR擴增檢測,共獲得5株轉基因陽性植株.實時熒光定量結果發現轉基因陽性植株內 phyA和EPSPS 基因的表達量均較對照植株有顯著提高.【結論】本研究成功構建了抗草甘膦和磷高效吸收基因雙價植物表達載體,獲得的轉基因陽性植株同時兼具草甘膦抗性及磷素高效吸收利用的特性,為培育甘藍型油菜優良種質資源提供了理論依據.
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