抗草甘膦與磷高效吸收基因雙價表達(dá)載體的構(gòu)建及對甘藍(lán)型油菜的遺傳轉(zhuǎn)化

摘要：【目的】甘藍(lán)型油菜是產(chǎn)油效率較高的油料作物,在其生長過程中往往伴隨著土壤環(huán)境中磷素匱乏及雜草脅迫,嚴(yán)重影響著最終產(chǎn)量和品質(zhì).因此,同時解決有效磷匱乏及草害問題已經(jīng)成為目前油菜研究的重要方向.【方法】采用PCR法克隆得到了與草甘膦抗性(eCTP和EPSPS)和磷高效吸收(Pht1;2和phyA )的相關(guān)目的基因,隨后構(gòu)建了雙價植物表達(dá)載體,通過農(nóng)桿菌介導(dǎo)法轉(zhuǎn)化甘藍(lán)型油菜,對轉(zhuǎn)化植株進(jìn)行PCR檢測篩選,并通過qRT-PCR法對篩選的陽性植株內(nèi)目的基因的表達(dá)進(jìn)行定量分析.【結(jié)果】將PCR擴增得到的片段經(jīng)瓊脂糖凝膠電泳檢測,結(jié)果符合預(yù)期.測序結(jié)果也與GenBank注冊序列同源性高度一致,可用于后續(xù)試驗.對轉(zhuǎn)基因油菜進(jìn)行草甘膦抗性篩選和PCR擴增檢測,共獲得5株轉(zhuǎn)基因陽性植株.實時熒光定量結(jié)果發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)基因陽性植株內(nèi) phyA和EPSPS 基因的表達(dá)量均較對照植株有顯著提高.【結(jié)論】本研究成功構(gòu)建了抗草甘膦和磷高效吸收基因雙價植物表達(dá)載體,獲得的轉(zhuǎn)基因陽性植株同時兼具草甘膦抗性及磷素高效吸收利用的特性,為培育甘藍(lán)型油菜優(yōu)良種質(zhì)資源提供了理論依據(jù).