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    核不均一核糖核蛋白C2基因克隆及其對(duì)肝癌細(xì)胞生長(zhǎng)的影響

    孫達(dá)權(quán); 石松; 徐瑩瑩; 雷霆雯; 莫曉川; 王筑婷; 李紅梅; 徐國(guó)強(qiáng) 貴州醫(yī)科大學(xué)生物化學(xué)與分子生物學(xué)教研室; 貴州貴陽(yáng)550025; 貴州醫(yī)科大學(xué)生理學(xué)教研室; 貴州貴陽(yáng)550025
    • 肝腫瘤
    • 核不均一核糖核蛋白c2
    • 細(xì)胞
    • 細(xì)胞增殖
    • 真核表達(dá)

    摘要:目的:探討人核不均一核糖核蛋白C2(RNPC2)基因在肝癌細(xì)胞生長(zhǎng)增殖中的作用。方法:采用RTPCR方法擴(kuò)增肝癌細(xì)胞SMMC-7721 RNA中RNPC2基因編碼區(qū)的目的片段,構(gòu)建真核表達(dá)載體p EGFP-RNPC2并進(jìn)行細(xì)胞轉(zhuǎn)染;采用G418抗生素篩選穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞,SDS-PAGE和Western blot法測(cè)定穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞內(nèi)RNPC2蛋白表達(dá),CCK-8法測(cè)定穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞的增殖能力。結(jié)果:從培養(yǎng)的肝癌細(xì)胞SMMC-7721中抽提總RNA并反轉(zhuǎn)錄成c DNA,通過RNPC特異性引物擴(kuò)增出RNPC2基因;測(cè)序鑒定獲得雙酶切分離純化目的片段后,插入真核表達(dá)載體p EGFP-C1中,成功構(gòu)建真核表達(dá)載體p EGFP-RNPC2;通過細(xì)胞穩(wěn)定轉(zhuǎn)染、G418藥物篩選和熒光顯微術(shù)獲得表達(dá)外源融合蛋白GFP-RNPC2的穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞株,并用Western blot驗(yàn)證及CCK-8分析證明GFP-RNPC2穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞的生長(zhǎng)增殖速率增加。結(jié)論:RNPC2可以促進(jìn)肝癌細(xì)胞生長(zhǎng)增殖。

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