核不均一核糖核蛋白C2基因克隆及其對(duì)肝癌細(xì)胞生長(zhǎng)的影響

摘要：目的：探討人核不均一核糖核蛋白C2（RNPC2）基因在肝癌細(xì)胞生長(zhǎng)增殖中的作用。方法：采用RTPCR方法擴(kuò)增肝癌細(xì)胞SMMC-7721 RNA中RNPC2基因編碼區(qū)的目的片段,構(gòu)建真核表達(dá)載體p EGFP-RNPC2并進(jìn)行細(xì)胞轉(zhuǎn)染;采用G418抗生素篩選穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞,SDS-PAGE和Western blot法測(cè)定穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞內(nèi)RNPC2蛋白表達(dá),CCK-8法測(cè)定穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞的增殖能力。結(jié)果：從培養(yǎng)的肝癌細(xì)胞SMMC-7721中抽提總RNA并反轉(zhuǎn)錄成c DNA,通過(guò)RNPC特異性引物擴(kuò)增出RNPC2基因;測(cè)序鑒定獲得雙酶切分離純化目的片段后,插入真核表達(dá)載體p EGFP-C1中,成功構(gòu)建真核表達(dá)載體p EGFP-RNPC2;通過(guò)細(xì)胞穩(wěn)定轉(zhuǎn)染、G418藥物篩選和熒光顯微術(shù)獲得表達(dá)外源融合蛋白GFP-RNPC2的穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞株,并用Western blot驗(yàn)證及CCK-8分析證明GFP-RNPC2穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞的生長(zhǎng)增殖速率增加。結(jié)論：RNPC2可以促進(jìn)肝癌細(xì)胞生長(zhǎng)增殖。