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    pGV141-ROCK2真核表達載體的構建及其在血管內皮細胞中的表達

    張麗君; 徐沁; 褚孟洋; 李程飛; 石菲; 高原; 孫喜慶; 趙疆東; 閆銘; 王永春 第四軍醫大學學員一旅; 陜西西安710032; 第四軍醫大學航空航天醫學系航空航天生物動力學教研室; 陜西西安710032; 第四軍醫大學西京醫院骨科; 陜西西安710032
    • 質粒
    • 載體
    • 內皮細胞
    • rho相關卷曲螺旋形成蛋白激酶

    摘要:目的:克隆人Rho相關卷曲螺旋形成蛋白激酶(ROCK)基因,構建pGV141-ROCK2真核表達載體,并觀察其在人臍靜脈內皮細胞(HUVEC-C)中的表達。方法:以RT-PCR的方法獲得ROCK2基因的CDS區,經Xho I、Kpn I雙酶切后,連接到pGV141載體中;將構建的pGV141-ROCK2真核表達載體,經PCR、雙酶切和測序鑒定后,將其轉染入HUVEC-C中;采用western blot法檢測轉染后HUVEC-C中ROCK2蛋白的表達情況。結果:PCR法、雙酶切法檢測到的目標條帶與目的條帶大小一致,測序結果顯示重組質粒中插入的ROCK2基因序列與Gen Bank編碼上的編碼區完全一致;與未轉染重組質粒的HUVEC-C比較,轉染pGV141-ROCK2載體的HUVECC中ROCK2蛋白的表達顯著增高,差異有統計學意義(P〈0.05)。結論:成功構建pGV141-ROCK2真核表達載體,體外轉染入HUVEC-C后可使ROCK2蛋白表達顯著增加。

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