蛋白質非酶糖基化終產物對足細胞自噬與凋亡的影響

摘要：目的：探討蛋白質非酶糖基化終產物（AGEs）作用下人足細胞自噬和凋亡發生情況及可能的信號轉導通路。方法：體外培養永生化人足細胞,以AGEs 100 mg/L分別不同時間（0、4、8、12、24 h）刺激足細胞。Western blotting檢測足細胞自噬標記性蛋白微管相關蛋白1B輕鏈3-II/I（LC3-II/I）、自噬相關基因Atg5、哺乳動物雷帕霉素靶點受體（m TOR）信號通路相關蛋白p70 S6激酶1（p-p70 S6 Kinase,p70 S6Kinase）表達水平;熒光顯微鏡觀察自噬溶酶體形成標志蛋白溶酶體膜蛋白（LAMP2a）;AnnexinⅤ/7-AAD雙染流式細胞術檢測足細胞早期和晚期凋亡。結果：（1）與0 h相比,100 mg/L AGEs刺激后足細胞LC3BII/I表達水平在4、8、12、24 h均明顯下降（P〈0.05）;Atg5蛋白表達水平在8、12、24 h均明顯下降（P〈0.05）,在12 h下降達到最高峰;p-p70 S6 Kinase水平在4、8、12 h升高（P〈0.05）,在12 h達峰,在24 h再次下降;（2）免疫熒光染色結果顯示,與0 h相比,100 mg/L AGEs刺激足細胞12 h LAMP2a表達明顯減少;（3）與0 h相比,100 mg/L AGEs刺激后足細胞發生早期凋亡＋晚期凋亡比例在4、8、12、24 h逐漸增加（P〈0.05）,在12 h達峰（14.07%）。結論：AGEs刺激下人足細胞自噬減少,凋亡增加,伴隨著m TOR/p70S6 Kinase信號通路激活。AGEs可能通過m TOR/p70 S6 Kinase信號通路途徑調節足細胞自噬與凋亡,從而導致足細胞損傷。