調控表達LacI蛋白的豬霍亂沙門氏桿菌C500Δasd株的構建

摘要：為了構建具有asd基因缺失和LacI蛋白表達調控的豬霍亂沙門氏桿菌C500株,試驗以豬霍亂沙門氏桿菌C500株為載體,對其基因組進行改造,使沙門氏桿菌asd基因缺失,隨后將araC PBADLacI序列置于其中,構建包含araC PBAD-LacI基因表達框的豬霍亂沙門氏桿菌C500Δasd基因突變株以及包含Ptrc啟動子的EGFP表達質粒pYA4514-EGFP,并驗證是否有LacI蛋白表達。結果表明:試驗成功構建出包含araC PBAD-LacI基因表達框的豬霍亂沙門氏桿菌C500Δasd基因突變株,以及包含Ptrc啟動子的EGFP表達質粒pYA4514-EGFP;Western-blot檢測驗證了突變菌在阿拉伯糖存在的條件下可大量表達LacI蛋白,而當pYA4514-EGFP質粒上的Ptrc啟動子受到抑制時,EGFP蛋白不表達;用IPTG誘導后可以消除LacI對Ptrc啟動子的抑制作用,EGFP蛋白表達。說明試驗成功構建了調控表達LacI蛋白的豬霍亂沙門氏桿菌C500Δasd基因突變株。