匍匐型地被菊再生及遺傳轉化體系的建立

摘要：為構建有效的地被菊再生和遺傳轉化體系,本研究以匍匐型地被菊雨花落英葉片為外植體,研究不同苗齡和激素配比對葉盤再生的影響;通過農桿菌介導法將外源基因導入野生型植株中,研究預培養、延遲培養、抗生素濃度等遺傳轉化條件對轉化效率的影響。結果表明,雨花落英葉盤轉基因最適再生條件為,以苗齡為30 d的組培苗幼嫩葉片為外植體,設置再生培養基配方為MS+6-BA 1. 5 mg·L-1+NAA 0. 8 mg·L-1,此時再生率高達91. 11%,平均芽數為5. 90;最優遺傳轉化組合為預培養2 d,侵染5min,共培養2 d,延遲培養5 d,之后進行選擇培養。羧芐青霉素在延遲培養階段最適抑菌濃度為400mg·L-1;潮霉素葉盤篩選的最適選擇壓為8~10 mg·L-1,生根篩選最適濃度為11 mg·L-1;培養后期加入6-KT可以有效提高抗性芽的再生率;調節6-BA濃度為1. 0 mg·L-1,蔗糖濃度為40 g·L-1,可以將得到的玻璃化苗轉化為正常苗。分子鑒定結果表明,15株抗性苗中有10株陽性苗,陽性苗概率為67%;與野生型植株相比,9個株系的CmERF12基因均受到了明顯的抑制表達。本研究建立了地被菊雨花落英再生和遺傳轉化體系,為進一步進行基因功能研究和遺傳改良奠定了一定的理論基礎。