內蒙古絨山羊TNFRSF1A基因shRNA表達載體的構建及鑒定

摘要：通過設計和合成TNFRSF1A基因的3條靶向shRNA,并分別插入到pSGU6/GFP/Neo載體中,成功構建出了3個干擾載體,通過脂質體介導法將干擾載體成功轉入到內蒙古絨山羊胎兒成纖維細胞中,并利用RealTimePCR檢測TNFRSF1A基因的表達量。由結果可知,TNFRSF1A基因的干擾載體經測序鑒定證明構建成功,干擾載體轉染內蒙古絨山羊胎兒成纖維細胞24h后可見綠色熒光表達,當到達48h時,轉染效率達到最大,shRNA-1、shRNA-2、shRNA-3三組中TNFRSF1A的mRNA表達水平均低于轉染空載體的NC組,且shRNA2對TNFRSF1A的mRNA表達具有最佳的干擾效果。綜上所述,該研究成功構建了TNFRSF1A干擾載體,為進一步研究絨山羊TNFRSF1A基因在毛囊生長與周期調控的作用奠定基礎。