BDNF干預(yù)MSCs源性外泌體減輕過(guò)氧化氫致PC12細(xì)胞氧化應(yīng)激損傷

摘要：目的探討經(jīng)腦源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子(BDNF)干預(yù)后的大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(MSCs)源性外泌體對(duì)H2O2損傷大鼠腎上腺嗜鉻細(xì)胞瘤細(xì)胞的保護(hù)作用。方法全骨髓培養(yǎng)法提取大鼠MSCs,取P3代分為對(duì)照組及干預(yù)組(培養(yǎng)基中加入30 ng/mL BDNF),分別收集細(xì)胞上清,超速離心法分離并純化外泌體,通過(guò)透射電鏡觀察鑒定外泌體形態(tài);用Western blot鑒定外泌體表面標(biāo)志蛋白CD9、CD63;實(shí)驗(yàn)將嗜鉻細(xì)胞瘤細(xì)胞PC12分為4個(gè)組:對(duì)照組、H2O2組、MSCs外泌體組和BDNF-MSCs外泌體組,前2組培養(yǎng)基中加入PBS,后2組加入相應(yīng)外泌體(MSCs外泌體組和BDNF-MSCs外泌體組外泌體蛋白濃度均為50μg/mL)均預(yù)處理12 h,后3組在培養(yǎng)基中加入H2O2(0. 521 mmol/L)對(duì)PC12建立氧化應(yīng)激的細(xì)胞損傷模型;于10 h后以CCK-8法檢測(cè)細(xì)胞活性,檢測(cè)活性氧(ROS)及超氧化物歧化酶(SOD)值,Western blot檢測(cè)Bcl-2與Bax蛋白質(zhì)表達(dá)情況。結(jié)果 P3代MSCs細(xì)胞表面CD90表達(dá)陽(yáng)性。成功提取出外泌體,透射電鏡下可見(jiàn)大量直徑40~100 nm的不規(guī)則球體或茶托形的囊泡結(jié)構(gòu),膜清晰,相對(duì)完整,Western blot顯示CD9、CD63蛋白表達(dá)陽(yáng)性。相比于單純損傷組與MSCs外泌體組,BDNF-MSCs外泌體組細(xì)胞活性最高、SOD活性最高、ROS含量最低、Bcl-2/Bax值最高。結(jié)論經(jīng)BDNF干預(yù)后的MSCs源性外泌體在H2O2對(duì)PC12細(xì)胞造成的氧化應(yīng)激損傷的保護(hù)作用優(yōu)于MSCs源性外泌體。