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人血管緊張素Ⅱ2型受體AT2R重組細胞系的構建與鑒定
陳惠瑩; 毛瑩瑩; 裴娜娜; 顏仁和; 萬鵬飛; 李紅衛 南方醫科大學檢驗與生物技術學院; 廣東廣州510515; 暨南大學附屬第一醫院病理科; 廣東廣州510163; 廣州伯尼茲生物科技有限公司; 廣東廣州510663
- hat2r
- compound21
- 慢病毒
- 穩定細胞系
- 前列腺癌
摘要：目的:構建人血管緊張素Ⅱ2型受體(hAT2R)過表達穩定細胞系,探討AT2R激動劑Compound 21等對前列腺癌細胞的作用及機制.方法:構建含hAT2R基因的慢病毒表達載體pLV-CMV-hAT2R-IRES-eGFP并包裝成慢病毒.將重組慢病毒載體pLV-CMV-IRES-eGFP-hAT2R感染前列腺癌細胞,并利用流式細胞術篩選出單克隆細胞株,RT-PCR及Western blot方法檢測重組細胞系中hAT2R表達水平,使用AT2R激動劑CGP42112檢測受體功能.結果:重組慢病毒載體感染PC-3、DU145前列腺癌細胞24 h后均能觀察到eGFP表達,用流式細胞術分別篩選出單克隆細胞株,RT-PCR及Western blot檢測結果顯示目的基因hAT2R在兩株重組細胞系中表達顯著升高,CGP42112處理24 h后,重組細胞系細胞活力較正常PC-3、DU145細胞顯著降低.結論:成功構建hAT2R過表達穩定細胞系.
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