首頁 > 期刊 > 自然科學(xué)與工程技術(shù) > 農(nóng)業(yè)科技 > 林業(yè) > 經(jīng)濟(jì)林研究 > 野杏SSR-PCR反應(yīng)體系優(yōu)化 【正文】
摘要:為建立穩(wěn)定可靠的野杏SSR-PCR反應(yīng)體系,以3個(gè)野杏無性系170號、240號、263號和1個(gè)西伯利亞杏無性系508號為試驗(yàn)材料,采用L16(45)正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)對影響野杏SSR-PCR反應(yīng)的5個(gè)因素在4個(gè)水平上進(jìn)行優(yōu)化。結(jié)果表明:各因素對反應(yīng)體系的影響由大到小依次為DNA模板濃度、引物、dNTP、Mg^2+、Taq聚合酶。野杏SSR-PCR最佳反應(yīng)體系(總體積20μL):dNTPs0.45mmol/L、Mg^2+2mmol/L、Taq酶1.125U、引物0.125μmol/L、DNA模板20ng。選用引物X128和60個(gè)野杏樣木對該體系進(jìn)行穩(wěn)定性驗(yàn)證,擴(kuò)增產(chǎn)物集中在100~200bp,穩(wěn)定度高,多態(tài)性良好,該體系可應(yīng)用于野杏分子標(biāo)記輔助育種等方面的研究中。
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