摘要：目的:構(gòu)建心臟阿霉素反應(yīng)蛋白(CARP)基因重組慢病毒過(guò)表達(dá)和RNA干擾載體并進(jìn)一步包裝慢病毒,為研究CARP在阿霉素(ADR)心肌病中的作用及機(jī)制奠定基礎(chǔ)。方法:將PCR擴(kuò)增的大鼠CARP基因序列和設(shè)計(jì)合成的短發(fā)夾RNA(shRNA)序列分別插入GV-358和GV-248表達(dá)載體,行DNA測(cè)序鑒定。采用重組CARP過(guò)表達(dá)和shRNA表達(dá)穿梭載體與Helper 1.0和Helper 2.0輔助包裝質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染人胚腎細(xì)胞HEK293T,進(jìn)行病毒包裝和擴(kuò)增,采用終點(diǎn)稀釋法測(cè)定病毒滴度。采用重組慢病毒感染HEK293T細(xì)胞,熒光顯微鏡觀察綠色熒光強(qiáng)度。采用重組慢病毒感染H9C2細(xì)胞,分為對(duì)照組、Scramble RNA組、CARP過(guò)表達(dá)組和shRNA CARP組,Western blotting法檢測(cè)各組細(xì)胞中CARP蛋白表達(dá)水平。結(jié)果:基因測(cè)序,CARP過(guò)表達(dá)及shRNA載體序列與原設(shè)計(jì)序列完全相符。載體轉(zhuǎn)染HEK293T細(xì)胞后,在熒光顯微鏡下可見(jiàn)綠色熒光蛋白表達(dá)。包裝的CARP過(guò)表達(dá)及shRNA病毒感染H9C2細(xì)胞后,與對(duì)照組比較,CARP過(guò)表達(dá)組細(xì)胞中CARP蛋白表達(dá)水平升高5.3倍(P=0.01),shRNA CARP組細(xì)胞中CARP蛋白表達(dá)水平降低53%(P=0.02)。結(jié)論:成功構(gòu)建了CARP過(guò)表達(dá)和特異性shRNA慢病毒表達(dá)載體并獲得高感染效率的過(guò)表達(dá)和RNA干擾慢病毒,后者在H9C2細(xì)胞中能夠干預(yù)CARP表達(dá)。