圓二色譜法分析金屬離子對鮑魚脯氨酰內肽酶的作用

摘要：使用原核表達系統(tǒng)表達了皺紋盤鮑( Haliotis discus hannai )脯氨酰內肽酶(prolyl endopeptidase,PEP),并對其進行高度純化。SDS-PAGE結果表明,該酶的相對分子質量約為85 ku,其二級結構主要由α-螺旋(28.3%)、反向平行結構(17.4%)、平行結構(8.70%)、β轉角(19.0%)、無規(guī)卷曲(28.5%)組成。選取PEP特異性熒光底物Suc-Gly-Pro-MCA測定其活性,并選取了多種常見金屬鹽溶液對其進行抑制作用分析。結果發(fā)現(xiàn),Al^3+、Cu^2+、 Zn^2+、Ag^+和 Pb^2+能夠抑制PEP的活性。利用圓二色譜法,對金屬離子作用下PEP的二級結構變化進行分析和計算。分析結果表明,不同金屬離子對PEP的作用效果不同:Al^3+、Cu^2+和Zn^2+在影響PEP結構時也影響其活性;Ca^2+、Mg^2+對PEP的結構和活性均不產生明顯影響,而Ag^+和 Pb^2+可在不影響PEP二級結構的前提下抑制其活性。