煙粉虱MED隱種抑制蛋白基因Btarrestin的克隆及特性分析

摘要：【目的】明確煙粉虱Bemisia tabaci MED隱種抑制蛋白基因Btarrestin是否參與吡蟲啉耐藥性。【方法】根據(jù)已有煙粉虱轉錄組數(shù)據(jù),利用RT-PCR克隆Btarrestin的全長序列,進行生物信息學分析。通過qPCR分析Btarrestin在煙粉虱MED隱種各個齡期(卵,1-2齡、3齡、4齡若蟲,雌、雄成蟲)以及吡蟲啉處理(100 mg/L)后成蟲中的表達量變化,明確其時空表達模式。利用RNAi技術沉默Btarrestin,觀察沉默前后Btarrestin表達量和煙粉虱MED隱種成蟲死亡率變化。【結果】成功克隆煙粉虱MED隱種Btarrestin的cDNA序列(GenBank登錄號: MK204377),編碼區(qū)全長1 227 bp,編碼409個氨基酸,預測所編碼的蛋白分子量約為45.33 kD,理論等電點(pI)為8.38。保守結構域分析表明,Btarrestin具有Arrestin_N和Arrestin_C兩個超家族保守結構域,符合抑制蛋白家族特征。分子系統(tǒng)樹分析表明,Btarrestin與褐飛虱Nilaparvata lugens的Arrestin親緣關系最近。Btarrestin的表達量隨煙粉虱MED隱種的生長發(fā)育逐漸升高,成蟲期表達量最高。100 mg/L吡蟲啉處理成蟲24 h后Btarrestin的表達量較對照增加了2.39倍。RNAi干擾Btarrestin后進行生物測定,煙粉虱MED隱種成蟲的死亡率上升了31.27%。【結論】Btarrestin可能與煙粉虱MED隱種對吡蟲啉的耐藥性有關。