一株野生粗毛纖孔菌的分類鑒定及其發(fā)酵上清液的抗腫瘤活性

摘要：【目的】對一株野生粗毛纖孔菌進(jìn)行分類學(xué)鑒定,并分析其發(fā)酵上清液抗腫瘤活性,為粗毛纖孔菌的開發(fā)利用及抗腫瘤活性機(jī)制研究提供理論依據(jù)。【方法】通過形態(tài)特性觀察、ITS序列分析及系統(tǒng)發(fā)育進(jìn)化樹構(gòu)建等方法對一株野生粗毛纖孔菌(簡稱IH3菌株)進(jìn)行分類學(xué)鑒定,并利用B16、Hep-3B、Hela、MCF-7、HCT-116和4T1 6種腫瘤細(xì)胞及正常細(xì)胞HUVEC分析該菌株發(fā)酵上清液的抗腫瘤譜。從石油醚、乙酸乙酯和正丁醇中篩選出萃取抗腫瘤活性物質(zhì)的最佳有機(jī)溶劑,利用液相色譜分離技術(shù)分離抗腫瘤活性組分,并利用MTT(四唑鹽)法分析活性組分對不同腫瘤細(xì)胞的半致死濃度(IC50)。【結(jié)果】IH3菌株的形態(tài)特性與粗毛纖孔菌相似,且其ITS序列與粗毛纖孔菌(MF183947.1)的相似度最高,為98%,鑒定為粗毛纖孔菌。系統(tǒng)發(fā)育進(jìn)化樹分析結(jié)果也顯示,IH3菌株屬于纖層孔菌屬類群,與3個(gè)粗毛纖孔菌菌株的親緣關(guān)系較近。IH3菌株的發(fā)酵上清液對不同腫瘤細(xì)胞的抑制活性排序?yàn)?B16>Hep-3B>Hela>MCF-7>4T1=HCT-116。正丁醇萃取的IH3菌株發(fā)酵上清液抗腫瘤活性組分對B16腫瘤細(xì)胞的抑制率最高,達(dá)80%,說明正丁醇對發(fā)酵上清液中抗腫瘤活性組分的萃取效果最佳。利用液相色譜分離方法可有效獲得純度較高的單一抗腫瘤活性組分(WIH3),該活性組分對B16、Hep-3B、Hela和MCF-7腫瘤細(xì)胞的半致死濃度(IC50)分別為29.322、37.387、47.029和58.009μg/mL。【結(jié)論】IH3菌株被鑒定為粗毛纖孔菌,與已發(fā)表的粗毛纖孔菌菌株存在遺傳差異,可能為粗毛纖孔菌的新亞種,其發(fā)酵上清液具有廣譜的抗腫瘤活性。