小胸鱉甲胞外銅鋅超氧化物歧化酶重組蛋白的原核表達及多克隆抗體制備

摘要：超氧化物歧化酶(SOD)是清除生物體內超氧陰離子自由基的主要抗氧化酶家族。基于原核表達系統,成功表達了擬步甲科Tenebrionidae小胸鱉甲Micordera punctipennis胞外銅鋅SOD的重組蛋白(本文定義為Trx-His-MpecCu/Zn-SOD)。經Ni 2+親和層析法純化重組蛋白后,研究了重組蛋白的部分酶學性質。通過足墊加皮下注射法3次免疫小鼠后,分別用ELISA和Western blot的方法檢測抗體效價和抗體特異性。結果表明,重組蛋白主要以包涵體形式存在,純化后的重組蛋白濃度為1.33 mg·mL^-1,酶活力為27.52 U·mg^-1。Trx-His-MpecCu/Zn-SOD在25~45℃具有比較穩定的酶活性,在35℃最高,同時表現出比較廣泛的酸堿耐受性(pH3~12),最適pH為9.0,表明重組蛋白的酶活性相對比較穩定。蛋白免疫法制備的鼠抗MpecCu/Zn-SOD多克隆抗體滴度高于1∶819 200。Western blot結果顯示,該抗體能免疫結合重組蛋白Trx-His-MpecCu/Zn-SOD和小胸鱉甲體內天然MpecCu/Zn-SOD,但不能與黃粉蟲Tenebrio molitor的總蛋白結合,說明制備的抗體效價較高且特異性較好。本研究結果為小胸鱉甲ecCu/Zn-SOD功能的深入研究奠定了基礎。