整合素α4半胱氨酸突變質粒的構建及谷胱甘肽化水平檢測

摘要：目的:旨在構建整合素α4半胱氨酸突變質粒,并初步鑒定α4的谷胱甘肽化修飾位點。方法:利用點突變技術將整合素α4的半胱氨酸殘基分別突變為天冬氨酸殘基,以免疫共沉淀的方法利用anti-Flag瓊脂糖珠富積突變的α4蛋白,采用體外谷胱甘肽化的方法檢測突變α4的谷胱甘肽化水平。結果:構建了α4的81、85、278、717、767、828位的半胱氨酸單突變質粒,體外谷胱甘肽化檢測表明這些單突變的α4仍具有谷胱甘肽化修飾。結論:成功構建了整合素α4所有的未形成二硫鍵的半胱氨酸突變的真核表達質粒,初步判定α4可能具有多個位點半胱氨酸殘基同時被谷胱甘肽化修飾。