高活性纖溶酶菌株篩選與基因克隆表達

摘要：本研究以本實驗室曾在酒曲、酒糟、窖泥等樣品中分離的具有醬香味的13株菌株作為出發菌株,經脫脂奶粉平板、纖維蛋白雙層平板篩選出纖溶酶活性最高的菌株GZHZ V-8 ,結合形態學特征、生理生化特征及16S rDNA序列同源性分析,GZHZ V-8 菌株為解淀粉芽孢桿菌( Bacillus amyloliquefaciens )。以GZHZ V-8 菌株總DNA為模板擴增出纖溶酶基因的編碼區,與pMD18-T載體連接、轉化至大腸桿菌( Escherichia coli ) DH5α,分析表明纖溶酶基因開放閱讀框包含1092 bp堿基,編碼363個氨基酸。纖溶酶基因與表達載體pET-22b(+)連接轉化至 E.coli BL21中表達,表達菌株經IPTG誘導表達分泌活性纖溶酶,培養后測得發酵上清液、菌體細胞破碎上清液和菌體細胞破碎沉淀的纖溶酶活力分別為613.26 IU/mL、407.38 IU/mL、993.12 IU/mL。