摘要：目的對重組突變巴曲酶進行酶動力學初步研究,并建立一種蛇毒類凝血酶活性測定方法。方法使用可控溫(37℃)紫外分光光度計,采用酶動力學測定法,測定重組突變巴曲酶的米氏常數(shù),優(yōu)化活性測定方法的反應(yīng)時間和線性范圍,驗證此方法精密度,并用發(fā)色底物法與血漿凝集法同時測定不同蛇種來源的類凝血酶活性。結(jié)果重組突變巴曲酶的米氏常數(shù)(37℃)Km值為256.28μmol/L、Vm值為0.005077μmol/min。該法呈現(xiàn)相應(yīng)的劑量關(guān)系曲線,反應(yīng)時間優(yōu)選為0~20min,線性范圍優(yōu)選為1~16.8nmol/L,擬合度R2≥0.99,方法精密度的變異系數(shù)≤5.0%。兩種不同方法測定不同蛇種來源類凝血酶的活性單位比例范圍為3.3~3.7(發(fā)色底物法/血漿凝集法),比例關(guān)系一致。結(jié)論建立的蛇毒類凝血酶活性測定方法擬合度優(yōu),精密度高,可測定不同來源的類凝血酶活性,并可替代傳統(tǒng)血漿凝集活性測定法。