禽流感病毒熒光免疫層析檢測(cè)試紙條的研制

摘要：禽流感是重要的人獸共患病,建立現(xiàn)場(chǎng)快速靈敏的檢測(cè)方法是防控其發(fā)生和流行的前提和基礎(chǔ)。本研究采用不同亞型流感毒株交叉免疫小鼠法來免疫小鼠,通過多個(gè)亞型的NP表達(dá)蛋白來篩選雜交瘤陽性細(xì)胞株,獲得分泌針對(duì)NP蛋白單克隆抗體的雜交瘤細(xì)胞4株。通過抗體的兩兩配對(duì),基于熒光量子點(diǎn)作為免疫層析抗體的標(biāo)記探針,借助免疫層析試紙條雙抗夾心法原理,篩選出了適用于免疫層析的兩株單克隆抗體,研制了禽流感病毒(Avian influenza virus, AIV )熒光免疫層析檢測(cè)試紙條[A lateral-flow immunoassay strip with quantum dots(QDs)against AIV , AIV -QD-LFIA],并對(duì)該試紙條進(jìn)行了特異性、敏感性、可重復(fù)性及可靠性分析。試驗(yàn)結(jié)果顯示:本研究所建立的 AIV -QD-LFIA試紙條檢測(cè)禽流感標(biāo)準(zhǔn)抗原H5N1-HK的敏感性達(dá)到104 EID50 ,檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)抗原H9N2-HK的靈敏度為102 EID50 ,比商品化的禽流感病毒抗原檢測(cè)卡靈敏度高100倍,比國家標(biāo)準(zhǔn)實(shí)時(shí)熒光RT-PCR(rRT-PCR)靈敏度低約100倍;可特異性地檢測(cè)出H5亞型、H7亞型、H9亞型、H1亞型、H3亞型等A型流感病毒,與 IBV 、 NDV 等常見禽呼吸道傳染病病原無交叉反應(yīng),且經(jīng)過了國家流感中心標(biāo)準(zhǔn)樣本盤的樣品測(cè)試,特異性強(qiáng);同時(shí)該法具有良好重復(fù)性,連續(xù)4周檢測(cè)20個(gè)樣品重復(fù)結(jié)果均為陽性;小規(guī)模田間試驗(yàn)顯示該法用于禽流感病毒的普查監(jiān)測(cè)結(jié)果可靠。可見本研究所建立的 AIV -QD-LFIA試紙條可滿足禽流感病毒快速、高靈敏的檢測(cè)需求,具有廣闊的應(yīng)用空間。