黑曲霉低聚葡萄糖氧化酶的分子克隆與生化特征

摘要：低聚葡萄糖氧化酶能夠氧化低聚葡萄糖末端殘基生成相應的低聚糖酸,在低聚糖酸的制備、食品、化工等方面具有潛在的應用價值。從黑曲霉基因組中發現1個疑似編碼低聚葡萄糖氧化酶開放讀框,共編碼473個氨基酸序列,包含2個保守結構域(FAD結合域和黃素結構域)和4個活性位點(His80、Cys141、Asp377和Try428);在畢赤酵母中表達的重組酶蛋白大小為61 kDa,比酶活0.33 U/mg。重組酶的最適作用溫度和pH值分別為75℃和9.0;在55~85℃和pH 5.0~9.0范圍內孵育4 h,仍能保持70%以上的酶活;Mn^2+和Fe^3+分別對酶活具有最強的激活和抑制作用。該酶的K m和V max為0.48 mmol/L和2.22μmol/(L·min),對麥芽三糖、麥芽四糖和麥芽五糖具有相對較高酶活。