腦血管內皮細胞Prmt5在腦血管發育過程中的表達及其下游靶分子

摘要：目的:研究內皮細胞中蛋白精氨酸甲基轉移酶5(PRMT5)在腦血管發育及血腦屏障建成的關鍵時期的表達變化及其潛在下游靶分子。方法:原位觀察PRMT5在小鼠不同發育時期腦血管內皮上的分布;流式分選獲得原代腦血管內皮,利用real-timePCR分析Prmt5的表達;體外培養小鼠內皮細胞敲降Prmt5后,利用Western印跡、real-timePCR、ChIP等方法檢測其對經典下游分子的影響。結果:PRMT5在胚胎期各時間點的腦血管內皮細胞質均有表達,小鼠出生后主要表達在腦血管內皮細胞核,在胚胎期18.5d時表達量顯著升高;小鼠腦血管內皮細胞體外細胞系中基因敲降Prmt5后,其經典對稱甲基化組蛋白產物H4R3me2s及H3R2me2s均明顯下降,Bmp4表達顯著上調;免疫共沉淀實驗提示Bmp4啟動子區域組蛋白具有H3R2me2s修飾,Prmt5基因敲降后,該組蛋白修飾顯著減少。結論:腦血管發育過程中PRMT5在腦血管內皮細胞中表達的位置和水平均發生變化,腦血管內皮細胞中PRMT5可以調節H4R3和H3R2對稱二甲基化水平,Bmp4啟動子區域組蛋白具有H3R2me2s修飾,且PRMT5可以抑制Bmp4表達。