可誘導型敲低PICH的MDA-MB-231細胞系的構建及鑒定

摘要：目的:構建穩定表達可誘導型polo樣激酶1相關檢查點解旋酶(PICH)短發夾RNA(shRNA)的三陰乳腺癌細胞系MDA-MB-231,并通過檢測加入誘導劑后細胞的增殖評價敲低效果。方法:設計并合成2條特異靶向PICH的shRNA序列,用分子克隆技術構建pLKO.1-tet-on-shPICH-Puromycin質粒,經菌落PCR及基因測序驗證;慢病毒包裝并感染細胞,通過抗性篩選獲得嘌呤霉素抗性的細胞;經強力霉素(DOX)誘導表達后,Western印跡檢測PICH的敲低效果,并通過MTT法對細胞增殖進行檢測。結果:菌落PCR凝膠電泳及DNA測序結果顯示pLKO.1-tet-on-shPICHPuromycin質粒構建成功;Western印跡結果表明,在DOX誘導下,MDA-MB-231細胞中的PICH蛋白質表達下降,表明可誘導型PICH穩定敲低細胞系構建成功;進一步實驗結果顯示,MDA-MB-231細胞的增殖隨PICH的表達下調而受到顯著抑制。結論:構建了可誘導穩定敲低PICH的三陰乳腺癌細胞系MDA-MB-231,為進一步研究PICH在三陰乳腺癌中的作用以及具體的分子機制奠定了實驗基礎。