骨髓基質細胞體外誘導小鼠肌源性干細胞造血分化初步研究

摘要：目的研究骨髓基質細胞(BMSC)對小鼠肌源性干細胞(MDSC)體外造血分化的影響并探討作用機制。方法選擇6~8周齡C57BL/6雄性小鼠4只;5 d齡C57BL/6小鼠10只,雌雄不限。采用密度梯度離心法獲取6~8周齡小鼠BMSC;同時利用混合酶消化聯合磁珠分選法分離5d齡小鼠后肢骨骼肌干細胞抗原1陽性(SCA-1^+)MDSC,建立以BMSC為飼養細胞的共培養體系。MDSC隨機分為3組,對照組為新鮮分離的MDSC,單培養組和共培養組分別進行單獨培養或與BMSC共培養7 d。采用相差顯微鏡觀察細胞形態;免疫細胞化學(ICC)法檢測SCA-1表達;Western blot檢測造血相關分子CD34和CD45表達,相對灰度法分析數據;real-time RT-PCR檢測Wnt信號通路相關分子的轉錄水平,數據采用AACt相對定量法分析。結果富集的MDSC胞體小而圓,表達SCA-1;單培養組細胞貼壁生長,呈梭形或紡錘形,可形成多核肌管;共培養組除少量細胞貼壁生長外,可見大量小圓細胞懸浮生長;與對照組相比,單培養組CD34和CD45表達未見顯著變化,共培養組顯著提高,差異有明顯統計學意義(CD34,t=9.068,P=0.010;CD45,t=4.860,P=0.018);在基因轉錄水平,與對照組比較,單培養組Wnt5a轉錄水平提高(t=7.395,P=0.018),共培養組Wnt2、Wnt3、CCND1和myc表達上調(Wnt2, t=4.964,P=0.008;Wnt3,t=9.513,P=0.010;CCND1,t=9.688,P=0.010;myc,t=7.985,P=0.005)。結論 MDSC單獨培養時以成肌分化為主;與BMSC共培養時發生造血分化,機制可能與激活經典Wnt信號通路有關。