新型vip3Aa基因的克隆表達及活性分析

摘要：采用vip通用引物對蘇云金芽胞桿菌TB22-5菌株中的vip基因進行鑒定,克隆得到一個vip3Aa型基因片段。通過生物信息學分析,設計并合成全長引物對vip3Aa型基因完整序列進行擴增,再轉入原核表達載體pET-28a,并在大腸桿菌BL21(DE3)中表達,最后對表達蛋白進行殺蟲活性分析。序列分析結果表明,此基因序列總長為2370 bp,預測其編碼蛋白由790個氨基酸組成,分子量約為88.5 ku;該預測蛋白質與已報道的Vip3Aa9蛋白序列存在最高的同源性,約為99.1%,該基因被正式命名為vip3Aa66。生物活性分析結果表明,Vip3Aa66蛋白對鱗翅目甜菜夜蛾幼蟲具有顯著的殺蟲活性,其LC50為23.75μg/mL,對鱗翅目的棉鈴蟲幼蟲活性較低,其LC50為243.87μg/mL。vip3Aa66基因可作為一個新的vip基因資源在棉鈴蟲和甜菜夜蛾的生物防治中應用。