首頁 > 期刊 > 自然科學與工程技術 > 醫藥衛生科技 > 基礎醫學 > 實驗動物與比較醫學 > 樹鼩Mfsd2a基因的克隆分析和不同組織表達量的檢測 【正文】
摘要:目的對樹鼩主要促進因子超家族成員2a(Mfsd2a)基因進行克隆、測序和生物信息學分析,并定量檢測其組織表達量。方法從樹鼩腦和脊髓中提取總RNA,RT-PCR擴增Mfsd2a基因片段,測序后利用生物信息學軟件對其序列特征、系統進化、編碼蛋白的結構和理化性質進行分析;以樹鼩β-actin為內參,qPCR檢測樹鼩Mfsd2a基因在不同組織中的表達情況。結果克隆獲得Mfsd2a基因片段全長1 796 bp,與NCBI上公布的樹鼩Mfsd2a基因預測序列高度一致,比對顯示其與MFS轉運蛋白超家族同源。其編碼區全長1 464 bp,編碼488個氨基酸。預測結果顯示樹鼩Mfsd2a蛋白具有明顯的疏水性區域,無信號肽,二級結構元件由α螺旋、β折疊、無規卷曲和延伸鏈組成。OCTOPUS分析發現Mfsd2a存在12個跨膜結構,修飾結構預測發現Mfsd2a蛋白存在兩處N糖基化位點,亞細胞定位發現其可能主要分布于細胞膜和內質網。qPCR檢測樹鼩不同組織的Mfsd2a表達,結果顯示各組織均有表達,在大腦、脊髓中的表達水平相對較高。結論成功克隆了樹鼩Mfsd2a基因,建立了該基因表達定量檢測方法,為今后利用樹鼩神經系統疾病模型深入開展Mfsd2a基因功能研究提供了理論和技術支持。
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