應(yīng)用以人轉(zhuǎn)錄組為靶點(diǎn)的shRNA文庫(kù)篩選肺癌腫瘤相關(guān)抑制基因

摘要：目的應(yīng)用shRNA文庫(kù)篩選肺上皮細(xì)胞相關(guān)腫瘤抑制基因,并驗(yàn)證其抑制細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)化的功能,為腫瘤防治提供新的靶點(diǎn)。方法用GP2-293病毒包裝細(xì)胞系建立shRNA逆轉(zhuǎn)錄病毒文庫(kù),感染永生化肺上皮細(xì)胞BEAS-2B,經(jīng)軟瓊脂克隆形成實(shí)驗(yàn)篩選轉(zhuǎn)染的上皮細(xì)胞克隆,選擇轉(zhuǎn)化細(xì)胞克隆經(jīng)PCR擴(kuò)增出所插入的shRN段,經(jīng)Sanger法測(cè)序和比對(duì)確定相應(yīng)shRNA的靶點(diǎn)基因。通過(guò)軟瓊脂克隆及裸鼠成瘤實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證候選腫瘤抑制基因INPP4B的腫瘤抑制功能。MTT實(shí)驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞的增殖情況。結(jié)果通過(guò)軟瓊脂克隆形成篩選出6個(gè)候選基因,選取INPP4B進(jìn)行功能驗(yàn)證。在BEAS-2B細(xì)胞中沉默INPP4B基因可促進(jìn)細(xì)胞的克隆形成,細(xì)胞增殖速度加快,沉默細(xì)胞系在裸鼠皮下成瘤能力增強(qiáng),說(shuō)明INPP4B參與腫瘤形成。結(jié)論 shRNA文庫(kù)及軟瓊脂克隆形成實(shí)驗(yàn)是篩選腫瘤抑制基因的一個(gè)有力工具,INPP4B是肺上皮細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)化抑制因子。