摘要：目的應用shRNA文庫篩選肺上皮細胞相關腫瘤抑制基因,并驗證其抑制細胞惡性轉化的功能,為腫瘤防治提供新的靶點。方法用GP2-293病毒包裝細胞系建立shRNA逆轉錄病毒文庫,感染永生化肺上皮細胞BEAS-2B,經(jīng)軟瓊脂克隆形成實驗篩選轉染的上皮細胞克隆,選擇轉化細胞克隆經(jīng)PCR擴增出所插入的shRN段,經(jīng)Sanger法測序和比對確定相應shRNA的靶點基因。通過軟瓊脂克隆及裸鼠成瘤實驗驗證候選腫瘤抑制基因INPP4B的腫瘤抑制功能。MTT實驗檢測細胞的增殖情況。結果通過軟瓊脂克隆形成篩選出6個候選基因,選取INPP4B進行功能驗證。在BEAS-2B細胞中沉默INPP4B基因可促進細胞的克隆形成,細胞增殖速度加快,沉默細胞系在裸鼠皮下成瘤能力增強,說明INPP4B參與腫瘤形成。結論 shRNA文庫及軟瓊脂克隆形成實驗是篩選腫瘤抑制基因的一個有力工具,INPP4B是肺上皮細胞惡性轉化抑制因子。