山羊痘病毒059蛋白表達(dá)及鑒定

摘要：為研究山羊痘病毒的059蛋白,本研究用PCR技術(shù)擴(kuò)增山羊痘病毒THX株059基因,并構(gòu)建了融合表達(dá)His標(biāo)簽的原核表達(dá)載體,測(cè)序鑒定并分析了059基因的核苷酸序列特征和推測(cè)的氨基酸序列結(jié)構(gòu)特征,將重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化大腸桿菌BL21,經(jīng)IPTG誘導(dǎo)表達(dá),用SDS-PAGE和Western-blot鑒定其蛋白表達(dá)情況。結(jié)果成功擴(kuò)增并構(gòu)建了山羊痘病毒059基因的原核表達(dá)載體PET-42b-059,THX株059基因全長為765bp,與參考株的相似性高達(dá)99.34%,與山羊痘病毒在親緣關(guān)系上較近,而與疙瘩皮膚病病毒與綿羊痘病毒的親緣關(guān)系較遠(yuǎn)。059蛋白會(huì)長255aa,由多個(gè)α螺旋和β片層交錯(cuò)構(gòu)成,分子量大小為29KDa,SDS-PAGE結(jié)果顯示其以包涵體的形式表達(dá),大小與理論相符,WesternBlot結(jié)果證明059蛋白與His標(biāo)簽進(jìn)行了融合表達(dá)。結(jié)果表明059蛋白可以較好原核表達(dá),為進(jìn)一步研究該蛋白的其他生物學(xué)特性奠定了基礎(chǔ)。