摘要：目的:構(gòu)建hFGFR1α(human fibroblast growth factor receptor 1 alpha, hFGFRα)穩(wěn)定細(xì)胞系,優(yōu)化獲得最適誘導(dǎo)表達(dá)條件,實(shí)現(xiàn)可誘導(dǎo)的、高效的穩(wěn)定表達(dá)。方法:將hFGFR1α基因編碼區(qū)全長克隆入pcDNA5/FRT/TO/2 × Flag表達(dá)載體,連同pOG44重組酶質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染人宿主細(xì)胞Flp-InTM-T-RexTM-293細(xì)胞系(HEK293H),潮霉素B篩選獲得陽性克隆細(xì)胞系HEK293H/hFGFR1ɑ。用不同濃度強(qiáng)力霉素(doxycline, Dox)或者不同作用時(shí)間對HEK293H/hFGFR1ɑ細(xì)胞系進(jìn)行誘導(dǎo)表達(dá),Western Blot鑒定hFGFR1ɑ蛋白的表達(dá)情況。結(jié)果:構(gòu)建了pcDNA5-FRT/TO/2 × Flag/hFGFR1ɑ重組表達(dá)載體,獲得了可被Dox誘導(dǎo)表達(dá)的HEK293H/hFGFR1ɑ穩(wěn)定細(xì)胞系;0.001μg/mL Dox即可誘導(dǎo)hFGFR1ɑ蛋白表達(dá),0.01μg/mL Dox即可誘導(dǎo)表達(dá)量達(dá)峰值;Dox對該細(xì)胞系作用2 h即誘導(dǎo)hFGFR1ɑ蛋白表達(dá),對其作用24 h后該細(xì)胞系的表達(dá)明顯增強(qiáng)。結(jié)論:成功構(gòu)建了可誘導(dǎo)的、高效的穩(wěn)定表達(dá)細(xì)胞系HEK293H/hFGFR1ɑ;Dox誘導(dǎo)該細(xì)胞系表達(dá)具有劑量差異性和時(shí)間依賴性。