熒光定量PCR結(jié)合PMA染料法評價口岸消毒效果的研究

摘要：目的利用疊氮溴化丙錠(PMA)結(jié)合實時熒光定量PCR(qPCR)技術(shù),建立應(yīng)用于口岸消毒效果的快速評價方法。方法針對細(xì)菌16S rRNA基因建立qPCR反應(yīng)體系,以銅綠假單胞菌為對象,采用菌片浸泡定量殺菌試驗對口岸常用含氯消毒劑(泰勝)進行消毒效果評價,分別比較培養(yǎng)計數(shù)法、qPCR和PMA-qPCR法評價消毒效果的有效性。結(jié)果基于16S rRNA基因的q PCR法重復(fù)性好,靈敏度高,細(xì)菌最低檢測濃度為63 cfu/ml;PMA處理對活菌無顯著影響。對比3種檢測方法發(fā)現(xiàn),未經(jīng)PMA處理的q PCR法檢測消毒前后細(xì)菌數(shù)量變化較小,而PMA-qPCR法檢測結(jié)果顯示消毒后細(xì)菌數(shù)量顯著下降(下降3.52個log值),且PMA-qPCR法的檢測結(jié)果與傳統(tǒng)培養(yǎng)法相近,說明PMAq PCR法能有效抑制死亡細(xì)菌的擴增,真實反映消毒后的細(xì)菌存活情況。結(jié)論建立的PMA-qPCR法進行口岸消毒效果評價具有快速、靈敏度高等優(yōu)點,有望發(fā)展為口岸適用的快速評價消毒效果的有利工具。