高效液相色譜-紫外/質(zhì)譜評(píng)價(jià)海洋天然產(chǎn)物體外抑制環(huán)氧合酶2活性方法研究

摘要：目的建立基于高效液相色譜-紫外(HPLC-UV)和高效液相色譜-多級(jí)離子阱質(zhì)譜分析(HPLC-ITMS/MS)的海洋天然產(chǎn)物體外抑制COX-2酶的活性評(píng)價(jià)方法。方法采用Agilent Poroshell 120C18色譜柱,以乙腈-0.05%磷酸水溶液為高效液相色譜流動(dòng)相,二元等度洗脫,流速為0.4 mL·min^-1,檢測(cè)波長(zhǎng)210nm,進(jìn)樣量10μL;質(zhì)譜條件下,流動(dòng)相改為乙腈-0.05%乙酸水溶液,進(jìn)樣量為1μL,選用ESI離子源,負(fù)離子電離模式,噴霧氣壓35psi,干燥氣(N2)流速12L·min^-1,干燥氣溫度350℃。結(jié)果建立的高效液相色譜-紫外和高效液相色譜-多級(jí)離子阱質(zhì)譜法精密度和穩(wěn)定性良好,對(duì)比兩者測(cè)定酶底物花生四烯酸的適用性顯示,基于HPLC-UV的評(píng)價(jià)方法適用極性較大的天然產(chǎn)物粗提物;HPLC-IT-MS/MS法則因其抗干擾能力強(qiáng),適用于復(fù)雜體系中極性較弱的活性物質(zhì)的檢測(cè)。以建立的HPLC-UV和HPLC-IT-MS/MS方法對(duì)海洋天然產(chǎn)物的COX-2酶抑制活性進(jìn)行評(píng)價(jià),天然產(chǎn)物粗提物中黃?？鸄nthopleura lanthogrammica Berkly乙醇粗提物和彎孢菌Curvularia lunata strain L2744發(fā)酵液粗提物對(duì)COX-2酶抑制作用較為明顯,抑制率分別為70.1%和25.48%。結(jié)論建立的評(píng)價(jià)方法具有適用性強(qiáng)、結(jié)果可靠等優(yōu)點(diǎn),有望為天然產(chǎn)物粗提物中COX-2酶抑制劑體外篩選提供技術(shù)參考。