淫羊藿次苷對犬頜骨間充質(zhì)干細胞增殖與成骨分化的影響

摘要：目的:研究淫羊藿次苷Ⅱ(IcarisidⅡ,ICSⅡ)對體外培養(yǎng)的比格犬頜骨間充質(zhì)干細胞(alveolar bone-derived stem cells,AMSCs)增殖與成骨分化的影響。方法:取比格犬頜骨骨片,體外分離培養(yǎng)出dAMSCs,傳代至第4代,做多向分化鑒定。以10^-5、10^-6、10^-7、10^-8、10^-9mol/L濃度的ICSⅡ刺激d AMSCs后,取1、3、5、7 d的細胞,分別用CCK-8及堿性磷酸酶(ALP)試劑盒檢測dAMSCs的增殖及ALP活性;用10^-6 mol/L的ICSⅡ處理dAMSCs后14 d,作ALP染色,21 d時作茜素紅染色,以判斷ICSⅡ?qū)毎只暗V化能力的影響。在成骨誘導(dǎo)及10^-6mol/L的ICSⅡ藥物誘導(dǎo)第4、8天后,用蛋白免疫印跡試驗分析成骨相關(guān)蛋白OSX、Runx-2及OCN的表達量;在誘導(dǎo)第6天時,利用RT-PCR分析成骨相關(guān)基因OSX、bFGF、Runx-2及OCN的表達情況。采用SPSS 22.0軟件包進行統(tǒng)計分析。結(jié)果:原代培養(yǎng)的dAMSCs貼壁生長,呈梭形,具備多向分化能力;ICSⅡ在不同濃度下均可促進dAMSCs的增殖,其ALP活性亦有提高,且在實驗濃度時可觀察到鈣結(jié)節(jié)形成。各成骨相關(guān)基因在ICSⅡ誘導(dǎo)后表達量有不同程度增加,均高于完全培養(yǎng)基組。隨著時間延長,加藥組Runx-2蛋白表達量有所下降,OCN蛋白表達量逐漸增多,與對照組差距加大;OSX的蛋白表達量雖高于對照組,但無統(tǒng)計學(xué)差異。結(jié)論:ICSⅡ可促進dAMSCs的增殖及成骨分化。