CRISPR/Cas9建立IL-12p35基因敲除大鼠C6細(xì)胞系表達(dá)研究

摘要：目的:運(yùn)用CRISPR/Cas9技術(shù)敲除大鼠C6細(xì)胞系的IL-12p35基因,構(gòu)建IL-12p35基因穩(wěn)定敲除細(xì)胞株。方法:構(gòu)建Lenti-sgRNA-EGFP質(zhì)粒CRISPR/Cas9系統(tǒng)的Cas9核酸內(nèi)切酶基因,慢病毒感染C6細(xì)胞后進(jìn)行MTT[3-(4,5-Dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide]檢測及PI-FACS(Facial Action Coding System)細(xì)胞周期檢測。結(jié)果:針對IL-12p35基因的KO1、KO2、KO3三個靶點(diǎn),進(jìn)行慢病毒轉(zhuǎn)染,轉(zhuǎn)染效率均大于80%。酶切前后靶點(diǎn)活性均下調(diào),免疫印跡驗(yàn)證C6細(xì)胞中靶點(diǎn)有效性。MTT檢測結(jié)果IL-12p35基因敲除后于第5天細(xì)胞增殖倍數(shù)明顯降低。IL-12p35基因敲除后顯著影響細(xì)胞周期G1期,G2/M期。結(jié)論:本研究構(gòu)建IL-12p35基因的CRISPR/Cas9敲除系統(tǒng),獲得穩(wěn)定的IL-12p35基因敲除細(xì)胞株,為后期IL-12p35與膠質(zhì)瘤細(xì)胞的發(fā)生、發(fā)展機(jī)制方面研究提供基礎(chǔ)。