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    利用CRISPR/Cas9技術產生肌肉特異表達Cas9的小鼠胚胎

    李昊; 陳勝男; 李松美; 樸善花; 安鐵洙; 王春生 東北林業大學生命科學學院動物發育研究室; 哈爾濱150040
    • rosa26
    • cas9
    • 基因編輯
    • 肌肉特異
    • 基因打靶

    摘要:目的通過CRISPR/Cas9技術獲得肌肉特異性表達Cas9蛋白小鼠胚胎,為建立肌肉特異表達Cas9小鼠動物模型奠定基礎。方法設計小鼠Rosa26位點sgRNA并通過體外酶切驗證活性,同時使用同源重組構建肌肉特異性同源打靶載體;通過顯微注射將Rosa26sgRNA與Cas9蛋白注射到小鼠胚胎,通過PCR及測序檢測胚胎的編輯情況,同時移植到假孕母鼠體內,待其生產;將同源打靶載體與Rosa26sgRNA和Cas9一起注射到小鼠胚胎,通過PCR檢測整合情況。結果體外酶切實驗表明,體外轉錄的sgRNA與Cas9蛋白聯合可對靶位點產生編輯作用;成功構建了肌肉特異性同源打靶載體Donor-SP-px459;通過原核注射獲得Rosa26基因編輯胚胎,經移植獲得Rosa26基因編輯小鼠;注射同源打靶載體后,成功獲得肌肉特異表達Cas9蛋白的基因打靶小鼠胚胎。結論利用CRISPR/Cas9技術,成功獲得Rosa26基因編輯胚胎和小鼠,并獲得了肌肉特異性表達Cas9蛋白小鼠胚胎,為利用基因打靶構建肌肉特異表達Cas9的小鼠動物模型奠定基礎。

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