首頁 > 期刊 > 自然科學與工程技術 > 基礎科學 > 生物學 > 中國實驗動物學報 > 利用CRISPR/Cas9技術產生肌肉特異表達Cas9的小鼠胚胎 【正文】
摘要:目的通過CRISPR/Cas9技術獲得肌肉特異性表達Cas9蛋白小鼠胚胎,為建立肌肉特異表達Cas9小鼠動物模型奠定基礎。方法設計小鼠Rosa26位點sgRNA并通過體外酶切驗證活性,同時使用同源重組構建肌肉特異性同源打靶載體;通過顯微注射將Rosa26sgRNA與Cas9蛋白注射到小鼠胚胎,通過PCR及測序檢測胚胎的編輯情況,同時移植到假孕母鼠體內,待其生產;將同源打靶載體與Rosa26sgRNA和Cas9一起注射到小鼠胚胎,通過PCR檢測整合情況。結果體外酶切實驗表明,體外轉錄的sgRNA與Cas9蛋白聯合可對靶位點產生編輯作用;成功構建了肌肉特異性同源打靶載體Donor-SP-px459;通過原核注射獲得Rosa26基因編輯胚胎,經移植獲得Rosa26基因編輯小鼠;注射同源打靶載體后,成功獲得肌肉特異表達Cas9蛋白的基因打靶小鼠胚胎。結論利用CRISPR/Cas9技術,成功獲得Rosa26基因編輯胚胎和小鼠,并獲得了肌肉特異性表達Cas9蛋白小鼠胚胎,為利用基因打靶構建肌肉特異表達Cas9的小鼠動物模型奠定基礎。
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