豬偽狂犬病病毒IgA抗體間接ELISA檢測方法的建立

摘要：為了建立檢測豬偽狂犬病病毒(PRV)黏膜免疫時特異的IgA抗體的間接ELISA方法,本研究采用PCR方法擴增了PRV gB基因截短片段,并將其連入原核表達質粒pGEX-6P-1,構建的表達質粒轉化至大腸桿菌Transetta(DE3)菌株后,采用IPTG進行誘導表達,得到gB重組蛋白的可溶性表達,并用谷胱甘肽親和層析柱進行蛋白純化。以純化的gB重組蛋白作為包被抗原,以山羊抗豬IgA-HRP為二抗,建立了豬偽狂犬病病毒IgA的間接ELISA檢測方法。經ELISA反應條件優化,確定抗原包被濃度為2.4 g/mL,封閉液為10 g/L明膠,一抗37℃孵育1.5 h,二抗1∶20000稀釋后37℃孵育0.5 h,TMB顯色液顯色10 min。該方法的批內和批間變異系數均小于10%,重復性較好。利用該間接ELISA方法對PRV黏膜免疫的仔豬進行檢測,結果可以在鼻腔黏液中檢測出特異的IgA抗體。本試驗為PRV黏膜免疫提供了初步檢測方法。