豬偽狂犬病病毒野毒株與疫苗株熒光定量PCR檢測方法的建立和應用

摘要：根據偽狂犬病病毒gD、gE基因序列設計2對引物及其對應的探針,通過對引物、探針濃度的優化,建立了豬偽狂犬病病毒野毒和減毒活疫苗株熒光定量PCR檢測鑒別方法,并評價其特異性、敏感性和重復性。結果顯示,豬圓環病毒、豬瘟病毒、豬流行性乙型腦炎病毒、豬細小病毒、豬繁殖與呼吸綜合征病毒、豬博卡病毒、豬流行性腹瀉病毒和豬傳染性胃腸炎病毒均無擴增曲線。野毒株均出現gD和gE基因擴增曲線,而疫苗株只出現了gD基因擴增曲線,表明該檢測方法具有良好的特異性。建立的gD和gE基因標準曲線Ct值和模板終濃度在1×10^8~1×10 copies/L范圍內均具有良好的線性關系,靈敏度均可達1×10 copies/L。對39份豬組織樣品進行檢測,熒光定量PCR檢出5份樣品豬偽狂犬病病毒gD、gE陽性,表明這5份豬組織樣品為豬偽狂犬病病毒野毒感染。常規PCR檢出5份豬偽狂犬病病毒陽性,經測序為野毒感染,2種方法符合率為100%。本研究建立的熒光定量PCR可用于豬偽狂犬病病毒的快速檢測和流行病學調查。