BTV-2型3型4型7型12型HPCE檢測方法的建立

摘要：為了建立同時鑒別檢測藍舌病毒(BTV)2型、3型、4型、7型及12型的快速方法,針對BTV不同血清型的VP2基因保守區,采用GeXP原理,設計了5對特異性嵌合引物和1對通用引物,優化建立了可單管同步鑒別BTV2型、3型、4型、7型及12型的HPCE方法。該方法僅對BTV 2型、3型、4型、7型、12型的病毒核酸有擴增,對BTV的其他基因型以及小反芻獸疫病毒、口蹄疫病毒均無擴增,特異性好。敏感性試驗結果顯示:該方法對單一病毒核酸的最低檢測量為100~1000 copies/L;對五種血清型病毒混合核酸的最低檢測量為100 copies/L。組內重復試驗與組間重復試驗結果均一致,重復性好。臨床樣品和模擬樣品檢測結果顯示,本研究建立的HPCE方法與OIE推薦的套式RT-PCR敏感性一致,且該方法可以特異、敏感、快速地鑒別藍舌病毒(BTV)2型、3型、4型、7型及12型。