摘要：2013-2016年期間,從云南陸良、富源、尋甸及西雙版納規(guī)模豬場經(jīng)Bartha-K61疫苗免疫豬群中發(fā)生流產(chǎn)的胎兒內(nèi)臟組織病料中成功分離獲得4株偽狂犬病病毒流行毒株,分別命名為FY-YN-2014、LL-YN-2014、XSBN-YN-2015和XD-YN-2014株。經(jīng)TCID50測定、動物致病性試驗、免疫保護試驗及gE、gD、gC、TK基因序列分析,結(jié)果顯示TCID50分別為10-6.083/100μL、10-5.75/100μL、10-6.583/100μL、10-6.5/100μL。采用Bartha-K61疫苗免疫過的經(jīng)產(chǎn)母豬血清樣品對XSBN-YN-2015分離毒株進行微量病毒中和試驗,其結(jié)果顯示gB抗體陽性、gE抗體陰性的血清樣品的中和效價在1∶16~1∶32之間,用gB、gE抗體均為陽性的血清樣品時,其中和效價在1∶64~1∶128之間。4株分離毒株接種昆明小白鼠、家兔2~5 d后,均出現(xiàn)奇癢的典型偽狂犬病臨床癥狀。對健康非免疫斷奶仔豬進行攻毒,同樣出現(xiàn)偽狂犬病的典型發(fā)病癥狀,且能從腦及內(nèi)臟組織中擴增出偽狂犬病病毒gE基因并成功回收分離到病毒株。在昆明小白鼠上的LD50分別是102.625 TCID50、102.875 TCID50、102.625 TCID50、102.5 TCID50。XSBN-YN-2015株在非免疫斷奶仔豬(偽狂犬病病毒gE、gB抗體陰性)測得的LD50=105.33 TCID50。XSBN分離毒株對免疫2次Bartha-K61疫苗的斷奶仔豬的攻擊試驗結(jié)果顯示,被攻擊仔豬均出現(xiàn)高熱、精神萎頓、厭食等臨床表現(xiàn),但1周后均能耐過并逐漸康復(fù),提示Bartha-K61疫苗株免疫豬只對當(dāng)前流行的偽狂犬病病毒云南變異毒株的攻擊基本能夠提供100%保護。4株偽狂犬病病毒云南流行毒株與近年來國內(nèi)報道的TJ、HeN1、NH1201等變異毒株的gE、gC、gD及TK基因核苷酸及氨基酸序列均高度一致,同源性高達99%~100%,均分屬于同一進化樹分支,不過與早期的國內(nèi)毒株SC、GDSH株,國外毒株Becker、Nia-1、CL15、Kaplan、Kolchis、Hercules、NIA3及疫苗株Bartha相比,均存在一定程度的變異,也未分屬于同一進化分支,因此