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    M蛋白攜帶TC標簽的重組新城疫病毒的構建及生物學特性鑒定

    范振; 孫軍峰; 趙冉; 韓宗璽; 劉勝旺 中國農業科學院哈爾濱獸醫研究所獸醫生物技術國家重點實驗室/禽呼吸道病創新團隊; 黑龍江哈爾濱150069
    • 新城疫病毒
    • tc標簽
    • m蛋白
    • 細胞定位

    摘要:基質蛋白(M)是新城疫病毒(NDV)重要的結構蛋白。為監測NDV感染后M蛋白在細胞中的動態分布,本研究利用反向遺傳操作技術,在NDV La Sota株全長c DNA中M基因編碼區的C端插入由18個核苷酸編碼的TC (Tetracysteine)標簽,轉染細胞經篩選獲得攜帶TC標簽的重組病毒La Sota-M-CTC。生長曲線測定結果顯示,La Sota-M-CTC能夠在雞胚中有效復制,其生長曲線與親本病毒La Sota相似。通過接種雞胚測定雞胚平均死亡時間檢測La Sota-M-CTC的毒力。結果顯示,La Sota-M-CTC的毒力與La Sota基本一致。此外,TC標簽能夠在重組病毒中穩定存在。將La Sota-M-CTC感染的細胞用雙砷綠色染料FlAsH-EDT2染色后經激光共聚焦檢測M蛋白在細胞中的分布。結果顯示,在La Sota-M-CTC感染細胞后1 h~2 h時,M蛋白主要分布于細胞質中,而在病毒感染4 h后M蛋白進入細胞核中,并持續存在至病毒感染后的12 h。本研究為監測M蛋白在NDV感染過程中的動態分布以及闡明M蛋白在NDV感染中的作用機制提供了實驗依據。

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