M蛋白攜帶TC標(biāo)簽的重組新城疫病毒的構(gòu)建及生物學(xué)特性鑒定

摘要：基質(zhì)蛋白(M)是新城疫病毒(NDV)重要的結(jié)構(gòu)蛋白。為監(jiān)測NDV感染后M蛋白在細(xì)胞中的動(dòng)態(tài)分布,本研究利用反向遺傳操作技術(shù),在NDV La Sota株全長c DNA中M基因編碼區(qū)的C端插入由18個(gè)核苷酸編碼的TC (Tetracysteine)標(biāo)簽,轉(zhuǎn)染細(xì)胞經(jīng)篩選獲得攜帶TC標(biāo)簽的重組病毒La Sota-M-CTC。生長曲線測定結(jié)果顯示,La Sota-M-CTC能夠在雞胚中有效復(fù)制,其生長曲線與親本病毒La Sota相似。通過接種雞胚測定雞胚平均死亡時(shí)間檢測La Sota-M-CTC的毒力。結(jié)果顯示,La Sota-M-CTC的毒力與La Sota基本一致。此外,TC標(biāo)簽?zāi)軌蛟谥亟M病毒中穩(wěn)定存在。將La Sota-M-CTC感染的細(xì)胞用雙砷綠色染料FlAsH-EDT2染色后經(jīng)激光共聚焦檢測M蛋白在細(xì)胞中的分布。結(jié)果顯示,在La Sota-M-CTC感染細(xì)胞后1 h~2 h時(shí),M蛋白主要分布于細(xì)胞質(zhì)中,而在病毒感染4 h后M蛋白進(jìn)入細(xì)胞核中,并持續(xù)存在至病毒感染后的12 h。本研究為監(jiān)測M蛋白在NDV感染過程中的動(dòng)態(tài)分布以及闡明M蛋白在NDV感染中的作用機(jī)制提供了實(shí)驗(yàn)依據(jù)。