重組CKB真核表達載體的構建及其穩定轉染NCI—H520細胞系的建立

摘要：目的構建pEGFP—N1－CKB真核表達載體并將其穩定轉染到肺鱗癌細胞NCI—H520中，建立穩定轉染的NCI—H520細胞系，為后續研究奠定基礎。方法以人CKBcDNA文庫為模板，用PCR擴增人CKBcDNA的編碼區，并將擴增的cDN段與載體連接后亞克隆到真核表達載體pEGFP-N1中。重組子經酶切分析及測序鑒定后，用脂質體轉染技術將其導入到人肺鱗癌細胞系NCI—H520，經G418篩選并建立穩定的轉染細胞株，應用Westernblot檢測轉染前后該細胞株CKB基因的表達。結果pEGFP—N1－CKB經酶切鑒定及DNA測序證實序列完全正確，真核表達載體構建成功；經Westernblot檢測，重組質粒轉染株中CKB基因的表達水平明顯高于對照組，證實CKB基因已穩定轉染到NCI-H520細胞中并得到表達。結論成功構建了pEGFP—N1－CKB真核表達質粒，建立了穩定表達CKB的NCI-H520細胞系，為進一步研究CKB的生物學功能奠定了基礎。