雌激素受體α抑制劑MPP在小鼠囊胚形成和滋養(yǎng)層干細(xì)胞中影響YAP核定位

摘要：目的研究雌激素受體α(estrogen receptor α,ERα)抑制劑甲基-哌啶-吡唑(methyl-piperidino-pyrazole,MPP)在小鼠桑葚胚和滋養(yǎng)層干細(xì)胞(trophoblast stem cells,TSCs)中對(duì)YAP 的影響。方法收集昆明(kunming,KM)小鼠8-細(xì)胞胚,置于0μmol/L(對(duì)照組)和5μmol/L(實(shí)驗(yàn)組)MPP 中培養(yǎng),分別于8h、12h 和24h 后收集各組桑葚胚,采用免疫熒光技術(shù)觀察YAP 表達(dá),采用Real Time-PCR 檢測(cè)MPP 處理24h 后Yap mRNA 表達(dá)變化;將小鼠TSCs 置于0μmol/L、2.5μmol/L、5μmol/L 和10μmol/L MPP 中培養(yǎng),48h 后觀察細(xì)胞形態(tài)改變,分別檢測(cè)Sox2、YAP、Cdx2 mRNA 和蛋白表達(dá)水平。結(jié)果小鼠8-細(xì)胞胚經(jīng)MPP 處理24h 后,桑葚胚YAP 蛋白核定位水平降低,Yap mRNA 水平無(wú)顯著改變;經(jīng)MPP處理48h 后,5μmol/L 組小鼠TSCs 細(xì)胞出現(xiàn)細(xì)胞團(tuán)塊,10μmol/L 組細(xì)胞增殖明顯受抑制;與對(duì)照組相比,5μmol/L 組細(xì)胞Sox2 mRNA 表達(dá)水平升高,Yap 和Cdx2 mRNA 水平無(wú)顯著改變,團(tuán)塊狀細(xì)胞中的YAP 蛋白失去明顯的核內(nèi)定位,SOX2 和CDX2 陽(yáng)性細(xì)胞的表達(dá)更加密集。結(jié)論 ERα在小鼠桑葚胚和TSCs 中調(diào)控YAP 核定位,其在TSCs 細(xì)胞中的作用與CDX2和SOX2 的表達(dá)有關(guān)。