摘要：為建立一種準(zhǔn)確、特異、高效、快速的非洲豬瘟病毒定量檢測(cè)方法,本研究根據(jù)非洲豬瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)早期表達(dá)基因K196R的基因序列,設(shè)計(jì)了TaqMan熒光定量PCR引物及探針,通過(guò)優(yōu)化退火溫度、引物及探針濃度,建立了快速檢測(cè)ASFV的TaqMan熒光定量PCR檢測(cè)方法。結(jié)果表明,該方法選擇的引物具有高度靈敏性和特異性,以構(gòu)建的重組質(zhì)粒為標(biāo)準(zhǔn)品建立的TaqMan熒光定量PCR方法的標(biāo)準(zhǔn)曲線具有良好的線性關(guān)系(R2=0.998),對(duì)ASFV核酸最低檢測(cè)下限為1.3拷貝,且與豬偽狂犬病病毒、豬細(xì)小病毒、豬圓環(huán)病毒2型等多種病原不存在交叉反應(yīng)。本研究建立的K196R基因?qū)崟r(shí)熒光定量PCR檢測(cè)方法為非洲豬瘟疫情提供了一種新型、靈敏和特異的早期檢測(cè)方法。