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    首頁 > 期刊 > 自然科學(xué)與工程技術(shù) > 醫(yī)藥衛(wèi)生科技 > 基礎(chǔ)醫(yī)學(xué) > 中華實驗和臨床病毒學(xué) > H5N1亞型流感病毒M2與NA基因真核表達(dá)載體的構(gòu)建與鑒定 【正文】

    H5N1亞型流感病毒M2與NA基因真核表達(dá)載體的構(gòu)建與鑒定

    郭建強; 姚立紅; 陳愛珺; 劉曉宇; 付金奇; 徐鵬衛(wèi); 張智清 中國疾病預(yù)防控制中心病毒病預(yù)防控制所; 病毒基因工程國家重點實驗室; 北京100052
    • 流感病毒a型
    • 病毒蛋白質(zhì)類
    • 神經(jīng)氨酸酶
    • 表達(dá)的序列標(biāo)記

    摘要:目的 構(gòu)建表達(dá)H5N1亞型流感病毒M2和NA基因的多種真核表達(dá)載體.方法 以我國分離的首株人H5N1亞型禽流感病毒(A/Anhui/1/2005)作為研究對象,PCR擴(kuò)增全長M2與NA基因.將M2基因克隆入真核表達(dá)載體pStar的IRES上游或下游的MCS,構(gòu)建重組pStar-M2/和pStar-/M2.將NA基因克隆人pStar載體IRES上游或下游的MCS,構(gòu)建重組pStar-NA/和pStar-/NA.將M2和NA基因先后克隆到pStar載體IRES序列的上游和下游MCS,分別構(gòu)建雙基因共表達(dá)重組pStar-M2/NA和pStar-NA/M2.將重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染293細(xì)胞,使用IFA方法 檢測各重組質(zhì)粒相應(yīng)外源基因的表達(dá).結(jié)果 通過酶切鑒定,各重組質(zhì)粒構(gòu)建正確.將其轉(zhuǎn)染293細(xì)胞后,使用IFA方法 檢測到了各重組質(zhì)粒中相應(yīng)外源基因的表達(dá).結(jié)論 構(gòu)建了多種表達(dá)H5NI亞型流感病毒M2和(或)NA基因的真核表達(dá)載體,為研究開發(fā)流感DNA疫苗奠定了基礎(chǔ).

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