鸚鵡熱嗜衣原體蛋白酶樣活性因子免疫優勢區基因重組蛋白的診斷應用研究

摘要：目的檢測鸚鵡熱嗜衣原體（Chlamydophila psittaci，c加）蛋白酶樣活性因子（cMamydial protease-likeactivity factor，CPAF）免疫優勢區基因在E．coli B121中高效表達的產物在印5感染診斷中的應用，為建立印s感染的快速診斷奠定實驗基礎。方法利用生物信息學軟件篩選出CpsCPAF免疫優勢區基因序列（CPAFm，A196～A450），設計特異性引物，PCR擴增目的基因，將其克隆入pGEX6p-2載體后轉化E．coliB121，利用IPTG誘導表達重組蛋白，Westernblot鑒定重組蛋白。以純化的重組蛋白作為包被抗原，建立血清學診斷的間接ELISA法；同時用商品ELISA試劑盒與建立的間接ELISA法檢測180份可疑Cps感染的病鴨血清標本，將檢測結果進一步用Westernblot方法驗證。結果構建原核重組質粒pGEX6p-2／Cps CPAFm，表達相對分子質量約為54×10^3的目的蛋白產物。以純化的重組蛋白為包被抗原建立間接ELISA法檢測Cps參考血清，其陰、陽性符合率均為100％；與肺炎嗜衣原體（C．pneu-moniae，印n）、沙眼衣原體（C．trachomatis，Ct）無交叉反應。對180份可疑病鴨血清標本進行檢測，與商品Birds Chlamydia Psittaci IgG ELISA試劑盒比較，以Westernblot方法作對照，自建的ELISA法符合率均為100％，Birds Chlamydia Psittaci IgG ELISA Kit符合率為77．5％～95．0％。結論以Cps CPAF免疫優勢區（A196～A450）作為診斷抗原，建立血清學診斷的間接ELISA法具有較好的臨床診斷價值。