棉鈴蟲脂肪酸結合蛋白的克隆與表達

摘要：為深入了解棉鈴蟲Helicoverpa armigera脂肪酸結合蛋白HaFABP1在參與細胞內脂肪酸代謝過程中的功能,基于酵母單雜交結果從幼蟲中腸cDNA中擴增得到HaFABP1的開發閱讀框,構建重組菌株BL21-pET28a-HaFABP1,進行融合蛋白His-HaFABP1的誘導和純化,并利用實時熒光定量PCR檢測棉鈴蟲不同時期和組織中HaFABP1的表達規律,最后檢測2-十三烷酮處理下棉鈴蟲6齡幼蟲中腸組織內HaFABP1的變化情況。結果顯示,克隆獲得的棉鈴蟲HaFABP1為405 bp,編碼134個氨基酸,相對分子量和等電點分別為15.08 kD和5.54;在37℃下用0.5 mmol/L異丙基硫代半乳糖苷(IPTG)誘導重組菌株4 h后,得到約18.4 kD的可溶性蛋白His-HaFABP1,純化后的融合蛋白條帶單一且大小符合預期;HaFABP1在棉鈴蟲的脂肪體、中腸、體壁和頭部中都有表達,在頭部的表達量最低,在中腸中的表達量最高;HaFABP1在棉鈴蟲幼蟲的每個發育時期都有表達,表達量總體呈現先降低后升高的趨勢,4齡時最低而1齡時最高;10 mg/g 2-十三烷酮處理飼料飼喂棉鈴蟲6齡幼蟲6 h和15 h后,中腸內HaFABP1的表達量與對照相比顯著提高,且隨著時間的延長逐漸增加。表明HaFABP1與棉鈴蟲的生長發育有關,并且有可能參與了昆蟲的解毒過程。