沙蔥螢葉甲表皮蛋白基因GdAbd的克隆及對溫度脅迫的響應(yīng)

摘要：為揭示沙蔥螢葉甲Galeruca daurica表皮蛋白基因GdAbd在其應(yīng)對溫度脅迫中的作用,采用RACE技術(shù)克隆表皮蛋白基因GdAbd的cDNA全長序列,并進(jìn)行生物信息學(xué)分析;利用實時熒光定量(qPCR)技術(shù)比較GdAbd經(jīng)不同溫度處理1 h及25℃恢復(fù)30 min后在沙蔥螢葉甲2齡幼蟲體內(nèi)的表達(dá)水平。結(jié)果表明,GdAbd基因全長708 bp(GenBank登錄號:MG874710),開放閱讀框為477 bp,編碼158個氨基酸;蛋白預(yù)測分子量為16.98 kD,等電點為4.26;編碼蛋白具有典型的表皮蛋白R&R保守結(jié)構(gòu)域,屬于RR-2亞族;具有1個跨膜結(jié)構(gòu)和1個信號肽。同源序列比對和系統(tǒng)發(fā)育分析表明,GdAbd與馬鈴薯甲蟲Leptinotarsa decemlineata SgAbd-4的同源性最高,氨基酸序列一致性達(dá)50.63%。qPCR檢測結(jié)果表明,與25℃對照相比,GdAbd基因表達(dá)水平在-10~5℃低溫脅迫時未發(fā)生顯著變化,而在35℃高溫脅迫時發(fā)生顯著上調(diào);-10、-5和0℃低溫脅迫后25℃恢復(fù)30 min可誘導(dǎo)GdAbd顯著上調(diào)表達(dá),但5℃低溫和35℃高溫脅迫處理與對照差異不顯著。說明短時低溫脅迫不能顯著影響GdAbd表達(dá),但脅迫后回溫可誘導(dǎo)其上調(diào)表達(dá)。